Подходы к криоконсервации эмбрионов кроликов методом витрификации

УДК 577.21                                                                                                       DOI: 10.52178/00234885_2022_6_4

Подходы к криоконсервации эмбрионов кроликов методом витрификации

Витрификация эмбрионов кролика

Полный текст статьи

Д.В. Попов¹*, Е.С. Колесник¹, Е.А. Ермакова¹, П.Г. Таргош¹, Г.Ю. Косовский¹

¹Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский ин­ститут пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»

Россия, 140143, Московская область, Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6.

*e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в браузере должен быть включен Javascript.

Для криоконсервации эмбрионов млекопитающих применяют метод программного замораживания, основанный на медленном снижении температуры и требующий специализированного оборудования, и ме­тод витрификации, основанный на принципе минимального охлаждаемого объема, когда за счет объема меньше 0,1 мкл эмбрионы охлаждаются и отогреваются с очень высокой скоростью. В данном исследовании выполнено сравнение выживаемости и способности к дальнейшему развитию после процедуры витрифика­ции-отогревания эмбрионов кроликов. С этой целью эмбрионы на стадиях развития морула и бластоциста и полученные методами in vitro и in vivo от 21 самки кролика породы белый великан подвергались процедуре витрификации и отогревания по двум протоколам, отличающимся режимами экспозиции и составом базо­вых растворов: 1) TLP-HEPES + 20% сыворотки крови (TH20) и 2) DPBS + 0,2% БСА. Результаты культиви­рования показали, что выживаемость эмбрионов после процедуры витрификации и отогревания составила: для протокола № 1 морулы in vitro - 53,3%, бластоцисты in vitro - 45,4%, морулы in vivo - 47,8%, бласто­цисты in vivo - 38,0%; для протокола № 2 морулы in vitro - 84,6%, бластоцисты in vitro - 70,0%, морулы in vivo - 68,0%, бластоцисты in vivo - 63,6%. Было уставлено, что выживаемость эмбрионов кролика после витрификации зависела от метода получения эмбрионов и стадии развития. Протокол № 2 лучше подходил для витрифкации эмбрионов кролика. Таким образом, для криоконсервации методом витрификации эмбри­онов кролика рекомендуется использовать эмбрионы, находящиеся на стадии развития морула, применяя протокол № 2 с составом базовых растворов DPBS + 0,2% БСА.

Ключевые слова: кролик, эмбрионы, морула, бластоциста, витрификация, криоконсервация.

1. 
   

    APPROACHES TO THE CRYOPRESERVATION OF RABBIT EMBRYOS BY VITRIFICATION

Vitrification of rabbit embryos

D.V. Popov^1*, E.S. Kolesnik¹, E.A. Ermakova¹, P.G. Targosh¹, G.Yu.Kosovsky¹

1Federal State Budget Scientific Institute “Scientific Research Institute of Fur - Bearing Animal Breeding and Rabbit Breeding named after VA. Afanas'ev”

Russia, 140143, Moscow Region, Ramensky District, Rodniki, Trudovaya Str., 6.

²Federal State Budgetary

*e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в браузере должен быть включен Javascript.

Cryopreservation of mammalian embryos involves programmed freezing, which is based on a slow temperature drop and requires specialized equipment, and vitrification, which is based on the principle of minimal refrigerated volume, where embryos are cooled and warmed at a very high rate due to a volume of less than 0.1 gl. In this study, we compared the survival and developmental ability of rabbit embryos after the vitrification-warming procedure. For this purpose, embryos at the morula and blastocyst stages of development and obtained by in vitro and in vivo methods from 21 female rabbits of the White giant breed were subjected to vitrification and heating according to two protocols with different exposure modes and composition of the basic solutions: 1) TLP- HEPES + 20% serum (TH20) and 2) DPBS + 0.2% BSA. The culturing results showed that the survival rate of embryos after the vitrification and warming procedure was: for protocol #1 Morula in vitro, 53.3%, Blastocysts in vitro, 45.4%, Morula in vivo, 47.8%, and Blastocysts in vivo, 38.0%; for protocol #2 Morula in vitro, 84.6%, Blastocysts in vitro, 70.0%, Morula in vivo, 68.0%, and Blastocysts in vivo, 63.6%. It was found that the survival rate of rabbit embryos after vitrification depended on the method of embryo acquisition and stage of development, and that Protocol #2 was better suited for vitrification of rabbit embryos. Thus, for cryopreservation by vitrification of rabbit embryos, it is recommended to use embryos at the developmental stage of morula and to use protocol № 2 with the composition of base solutions DPBS + 0.2% BSA.

Keywords: rabbit, embryos, morula, blastocyst, vitrification, cryopreservation.